1 范围
本标准规定了甘油含量的液相色谱测定方法。
本标准适用于不同含量规格的皂化甘油和合成甘油含量的测定。
本标准也适用于定性鉴别掺有乙二醇、二甘醇、三甘醇和山梨醇等为主要原料的甘油替代品。
2 规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法(ISO 3696：1987，MOD)
3 方法提要
本方法采用氨基键合柱、反相色谱分离法，在备有示差折光检测器(RID)的高效液相色谱仪上，用外标法进行定量测定。
4 试剂和材料
除非另有规定，仅使用分析纯试剂，实验所用水应符合GB/T 6682 中一级水要求。
4.1 乙腈：HPLC级。
4.2 流动相：乙腈+水，85+15(V/V)。
4.3 甘油标准品：已知含量。
4.4 针头式尼龙质过滤器：0.45μm，直径13mm。
4.5 尼龙质或再生纤维素质过滤膜：0.45μm，直径47mm。
5 仪器
5.1 高效液相色谱仪。
5.2 检测器：示差折光检测器，并带有致冷热柱温箱。
5.3 色谱柱：NH2柱，250mm×4.6mm(i.d.)，5m或相当者。
5.4 超声仪。
5.5 容量瓶，50mL和100mL。
5.6 分析天平，感量0.1mg。
5.7 液体称量瓶，25mL。
6 色谱操作条件
6.1 流动相：乙腈十水，85+15(V/V)(4.2)，在线脱气或经当天预先脱气；
6.2 流速：1.0mL/min；
6.3 柱温：30.0℃；
6.4 RID温度：35.0℃；
6.5 进样量：10.0μL，用流动相洗针。
注：上述液相色谱条件系通用的操作参数，可根据不同仪器的特点，对给定操作参数作适当调整，以期获最佳分离效果。附录A提供了“ Agilent1100+G1362A”系统和“ Waters2695+2414”系统的典型色谱条件。有关甘油与甘醇及山梨醇的液相色谱法定性鉴别试验参见附录B。
7 测定步骤
7.1 标准溶液的配制
称取甘油标准品(4.3)约0.1g(精确至0.0002g)，置于50mL容量瓶中，用流动相(4.2)稀释至刻度，摇匀后在超声波水浴中超声约5min。于0℃~5℃存放，有效期半年。
7.2 试样溶液的配制
称取含相当于标准品约0.1g的试样(精确至0.0002g)，置于50mL容量瓶中，用流动相(4.2)稀释至刻度，摇匀后在超声波水浴中超声5min。经0.45μm针头式尼龙质过滤器(4.4)过滤。
7.3 测定
在上述操作条件下，用流动相平衡系统，待仪器稳定后，连续注入数针标样溶液，计算各针峰面积响应值的重复性，待相邻两针的峰面积响应值变化小于1.0%时，则可测定样品。
丙三醇的液相色谱图参见附录C的图C.3。
8 结果计算
按式(1)计算样品中丙三醇的含量Y，以质量分数计，单位为克每千克(g/kg)：
式中：
Y——样品中丙三醇的含量，以质量分数计，单位为克每千克(g/kg)；
A标——两针标样溶液中丙三醇峰面积的平均值；
A样——两针试样溶液中丙三醇峰面积的平均值；
m标——丙三醇标样的质量，单位为克(g)；
m样——样品的质量，单位为克(g)；
P——一丙三醇标样的含量，单位为克每千克(g/kg)。
9 精密度
在8个实验室，对3个规格水平的试样进行方法精密度试验，结果见表1。
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