NY/T 1286-2007 花生黄曲霉毒素B1的测定 高效液相色谱法 检测标准

1 范围

本标准规定了采用高效液相色谱法测定花生黄曲霉毒素B1含量的方法。

本标准适用于花生中黄曲霉毒素B1的测定。

本方法检出限为1.0μg/kg。

2 规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB 5491 粮食、油料检验扦样、分样法

GB 6682 实验室用水规定(GB 6682-1992，eqv ISO 3696-1987)

3 原理

样品中黄曲霉毒素B1经提取浓缩、衍生化，反相C18柱分离后，在激发波长365mm，荧光波长440nm检测，外标法定量，计算样品黄曲霉毒素B1含量。

4 试剂

下列试剂除注明外均为分析纯，水为GB 6682 规定的二级水。

4.1 甲醇，色谱纯。

4.2 乙腈，色谱纯。

4.3 甲醇溶液(含4%氯化钠)，称取4g氯化钠(NaCl)溶于70mL甲醇和30mL水的混合溶液。

4.4 三氟乙酸。

4.5 石油醚(60℃~90℃)。

4.6 三氯甲烷。

4.7 黄曲霉毒素B1标准储备液，10mg/L。

5 仪器设备

5.1 天平，感量±1mg。

5.2 切片机。

5.3 粉碎机。

5.4 旋涡混合器。

5.5 超声波清洗器，功率不低于50W。

5.6 干热氮吹仪，控温精度50℃±2℃。

5.7 中速定性滤纸。

5.8 烘箱，控温精度50℃±2℃。

5.9 0.45μm有机相滤膜。

5.10 Nova-pak C18色谱柱(3.9mm×150mm)。

5.11 液相色谱仪(带荧光检测器)。

6 取样

按GB 5491 执行。

7 试样的制备

样品中的水分及挥发物含量超过10%时，在45℃左右的条件下通风干燥。将干燥的花生样品在切片机中切片至0.5mm左右，再经粉碎机粉碎，过0.42mm筛。

8 分析步骤

8.1 提取

称取20g(精确至10mg)样品，置于250mL具塞锥形瓶中，加60mL甲醇溶液(4.3)。50℃±2℃水浴超声提取5min(每隔1min取出旋涡混合1次)，过双层中速定性滤纸(5.7)，收集滤液于小烧杯中取滤液10mL于试管a中，加入5mL石油醚(4.5)，旋涡混合30s，静置2min，待分层后，弃上层，取下层溶液5mL于试管b中，加入5mL三氯甲烷(4.6)至试管b中，旋涡混合10s，静置2min，取出上层于试管c中，再加入5mL三氯甲烷(4.6)至试管b中，旋涡混合10s，静置2min，取上层。合并两次提取液于试管c中。

8.2 柱前衍生

将提取液置于干热氮吹仪(5.6)50℃恒温吹干，加入200μL衍生试剂(4.4)，盖好塞子，旋涡混合30s，50℃烘箱中衍生5min，置于干热氮吹仪(5.6)50℃恒温吹干，用1mL流动相溶解，过有机相滤膜(5.9)，滤液用液相色谱分析。

8.3 色谱分析

8.3.1 取黄曲霉毒素B1标准储备液(4.7)，用甲醇(4.1)稀释至20μg/L、40μg/L、80μg/L、160μg/L、320μg/L标准使用液连同样品依次进样，进行液相色谱检测，建立工作曲线。

8.3.2 色谱条件：流动相：乙腈+甲醇+水=13+12+75，流速：0.8mL/min，进样量10μL，柱温30℃，检测器：EX：365nm，FM：440nm

9 结果计算

试样中黄曲霉毒素B1含量以质量分数W计单位以微克每千克表示(g/kg)，按公式(1)计算：

W=m1×V1xD/V2×1000x1000/m          （1）

式中：

m1——从工作曲线上计算出进样体积样品中黄曲霉毒素B1质量，单位为微克(pg)；

V1——加入流动相体积的数值，单位为毫升(mL)；

V2——进样体积，单位为微升(L)；

D——样液的总稀释倍数；

m——试样质量，单位为克(g)。

计算结果保留小数点后一位。

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