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NY/T 2332-2013 红参中总糖含量的测定 分光光度法 检测标准

   日期:2019-09-02     浏览:3    
内容简介:本标准规定了用分光光度法测定红参中总糖(以葡萄糖计)的含量。

1 范围

本标准规定了用分光光度法测定红参中总糖(以葡萄糖计)的含量。

本标准适用于红参中总糖含量的测定。

本标准方法的线性范围为0.012mg~1.8mg。

本标准方法的定量限为1.2%。

2 规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法

3 原理

试样中水溶性糖和水不溶性多糖经盐酸水解后转化成还原糖,与3,5-二硝基水杨酸共热后被还原成棕红色的氨基化合物在波长520m处测定吸光度,吸光度值与还原糖含量成正比。

4 试剂和材料

除非另有说明,均使用分析纯试剂,水为GB/T 6682 规定的三级水。

4.1 10%盐酸溶液:取27mL盐酸加水稀释至100mL。

4.2 10%氢氧化钠溶液:称取100g氢氧化钠加水溶解并稀释至1000mL。

4.3 30%氢氧化钠溶液:称取30g氢氧化钠加水溶解并稀释至100mL。

4.4 1%3,5-二硝基水杨酸溶液:称取10g3,5-二硝基水杨酸,加水溶解并稀释至1000mL。

4.5 显色剂(DNS试剂)

a) 甲液:称取6.9g结晶苯酚溶于15.2mL氢氧化钠溶液(4.2)中,并稀释至69mL,在此液中加入6.9g亚硫酸氢钠,溶解即得。

b) 乙液:称取255g酒石酸钾钠,加入300mL氢氧化钠溶液(4.2)中,溶解后,再加入880mL3,5-二硝基水杨酸溶液(4.4)中,混匀即得。

将甲液与乙液混合摇匀,贮于棕色试剂瓶中,在室温下放置7d后方可使用(4℃冰箱冷藏,保质期6个月)。

4.6 葡萄糖标准品(C6H12O6):含量大于99.5%。

4.7 葡萄糖标准溶液[(C6H12O6)=lmg/mL]:准确称取葡萄糖标准品10mg,加少量水溶解并稀释定容至10mL,摇匀,备用(现用现配)。

4.8 碘化钾一碘溶液:称取1g碘和10g碘化钾溶于50mL水中,再加2mL冰乙酸,加水稀释至100mL。

4.9 0.1%酚酞指示剂:称取0.1g酚酞,加95%乙醇溶解并稀释至100mL。

4.10 D101型大孔吸附树脂。

5 仪器和设备

5.1分光光度计。

5.2 分析天平:感量±0.0001g。

5.3 分析天平:感量±0.01g。

5.4 恒温水浴锅。

5.5 涡旋振荡器。

5.6 粉碎机:配备0.25mm孔径的金属筛网。

6 分析步骤

6.1 试样制备

取代表性样品约100g,用粉碎机粉碎至通过0.25mm孔径筛,装人样品瓶中备用。

6.2 试样前处理

称取1g试样(精确到0.1mg),置50ml具塞刻度试管中,用量筒加入25mL盐酸溶液(4.1),沸水浴中加热20min后,用碘化钾_碘溶液(4.8)检査水解程度(取1滴水解液于白瓷板上,加人1滴碘化钾—碘溶液,若不显蓝色,则已水解完全;如显蓝色,则未水解完全,继续水解,每2min检査一次水解程度,直至不显蓝色)。水解完全冷却后将其全部转移至100mL锥形瓶中,加人0.5mL酚酞指示剂(4.9),用氢氧化钠溶液(4.3)中和至溶液呈红色,加入5gD101型大孔吸附树脂(4.10),在涡旋振荡器上振荡50min后过滤,加水定容至100mL再准确吸取10.0mL上述溶液置100mL容量瓶中,加水稀释至刻度,此溶液为试样测试液。

6.3 标准曲线的制定

分别吸取0mL、0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL、1.2mL和1.4mL的葡萄糖标准溶液(4.7)至25mL的具塞刻度试管中,此标准溶液葡萄糖含量相当于0mg、0.2mg、0.4mg、0.6mg、0.8mg、1.0mg、1.2mg和1.4mg,加水至2mL,加入2 ML DNS试剂(4.5),然后将试管放入沸水浴中加热6min,立即在冰水中冷却后,转移至25mL容量瓶中,定容摇匀,用分光光度计在波长520nm处测定吸光度,以葡萄糖含量为横坐标,吸光度为纵坐标,绘制标准曲线。

6.4 测定

准确吸取1mL待测液(6.2)于25mL的具塞刻度试管中,按6.3条“加水至2mL”以下步骤操作,以空白溶液调零,分别测定吸光度值,根据回归方程计算相应的糖含量。

6.5 空白试验

除不加试样外,其余操作步骤同试样溶液测定。

7 结果计算

试料中总糖(以葡萄糖计)含量ω以质量分数(%)表示,按式(1)计算。

ω=(m1×V×f×10-3)/(m*V1)

式中:

m1——根据标准曲线计算的葡萄糖含量,单位为毫克(mg);

V——试样的定容体积,单位为毫升(mL);

V1——比色测定时移取试样待测液的体积,单位为毫升(mL);

f——试样的稀释倍数;

m——试料的质量,单位为克(g)。

更多标准内容点击以下链接获取标准全文:

下载地址:《NY/T 2332-2013 红参中总糖含量的测定 分光光度法

 
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